Instalação de colunas de HPLC: passo a passo para maximizar a performance e a vida útil

Olá, bem-vindo ao blog da Matrix LCMS! No post de hoje, vamos abordar um tema essencial para todos que trabalham com cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC): a instalação correta de colunas de HPLC. Embora possa parecer uma tarefa simples, realizar a instalação de maneira adequada é crucial para garantir a qualidade das suas análises e a durabilidade dos equipamentos. Vamos discutir o passo a passo, melhores práticas e cuidados que você deve ter ao instalar uma coluna de HPLC, seja ela nova ou usada. Acompanhe para aprender e otimizar suas operações laboratoriais!

Já vou deixar o link do vídeo aqui para você curtir e comentar também! 😊

Primeiros passos: avaliando a situação da coluna

Antes de instalar a coluna, é fundamental avaliar sua condição atual. Pergunte-se: esta é uma coluna nova, uma coluna usada que conheço o histórico de uso, ou uma coluna usada de procedência desconhecida? Sempre parta do princípio mais conservador, especialmente se a coluna foi utilizada anteriormente e você não tem certeza de como foi manuseada.

• Colunas Novas: Geralmente vêm em caixas do fabricante, acompanhadas de um manual de "Care and Use" e, às vezes, um certificado de análise. Essas documentações são essenciais para entender as especificações e os cuidados específicos recomendados para aquela coluna. Se não as encontrar, visite o site do fabricante para obter essas informações.

Figura 1: Exemplo de manual “care and use” de uma coluna. Esses manuais acompanham as colunas cromatográficas, mas podem ser obtidos facilmente nos sites dos fabricantes das colunas.

• Colunas Usadas: Especialmente quando o histórico de uso é desconhecido, é crucial realizar uma limpeza e condicionamento adequados para remover possíveis contaminantes e preparar a coluna para uso.

Instalação da coluna: etapas iniciais e considerações

Posicionamento da Coluna: Sempre instale a coluna no sentido do fluxo indicado pelo fabricante, geralmente marcado por uma seta na coluna. Conecte a tubulação que sai do injetor à ponta da coluna onde está a base da seta. Deixe a outra ponta, que normalmente se conectaria ao detector, desconectada por enquanto.

Figura 2: Exemplo de manual “care and use” de uma coluna. Esses manuais acompanham as colunas cromatográficas, mas podem ser obtidos facilmente nos sites dos fabricantes das colunas.

2) Pré-Limpeza da Coluna: Antes de conectar ao detector, inicie o fluxo de uma solução de limpeza para garantir que qualquer impureza ou partícula sólida seja removida antes de chegar ao detector. Use uma solução composta por 90% água e 10% de solvente orgânico. Esta mistura ajuda a dissolver sais ou tampões residuais que possam estar presentes na coluna.

3) Tempo e Vazão: Para uma limpeza eficiente, mantenha um fluxo contínuo de aproximadamente 0,5 ml/min durante 20 a 30 minutos. Esse tempo é geralmente suficiente para limpar a coluna de forma eficaz sem danificá-la.

4) Ativação da Coluna: Para fase reversa, após a pré-limpeza, mude para uma solução de ativação, como 90% de solvente orgânico e 10% aquoso, ou até mesmo uma solução majoritariamente orgânica. Isso ajuda a ativar os sítios de ligação na coluna, preparando-a para fornecer uma performance ideal. Se for fase normal, considere utilizar 100% isopropanol.

5) Conexão ao Detector: Após a limpeza e ativação, pare o fluxo e conecte a tubulação que vai para o detector. Essa abordagem evita que impurezas sejam arrastadas para o detector, o que poderia comprometer a precisão das suas análises.

Cuidados Adicionais com Conexões e Tubulações

Além da instalação e ativação da coluna, é fundamental verificar as condições das conexões e tubulações. Uma má conexão pode resultar em vazamentos, contaminação ou perda de eficiência na análise.

• Conexões de Tubulação: Certifique-se de que as conexões sejam bem apertadas e estejam no comprimento correto. Conexões excessivamente longas ou curtas podem prejudicar a eficiência do sistema e causar distorções nos picos cromatográficos.

Figura 1: Tipos de conexões adequada e inadequadas que acontecem com tubulações e conectores de HPLC.

• Condição das Tubulações: Observe se as tubulações estão desgastadas, picotadas ou danificadas. Tubulações em mau estado devem ser substituídas para evitar vazamentos e garantir a integridade dos resultados.

Após a Análise: Limpeza e Armazenamento da Coluna

Após finalizar suas análises, não se esqueça de realizar uma limpeza adequada da coluna antes de armazená-la. Utilize uma solução de limpeza similar à utilizada na pré-limpeza (90% água e 10% orgânico) seguida de uma solução de solvente orgânico para remover quaisquer resíduos que possam causar danos à coluna durante o armazenamento. Esse cuidado simples pode prolongar significativamente a vida útil da sua coluna e manter a performance elevada por mais tempo.

Conclusão: Garantindo a Qualidade das Análises e a Durabilidade dos Equipamentos

Seguir estas práticas recomendadas ao instalar e utilizar colunas de HPLC é fundamental para garantir resultados precisos e a longevidade do seu equipamento. Pequenos cuidados podem evitar grandes problemas, como a contaminação do detector ou a necessidade de substituição precoce de colunas.

Se você tiver dúvidas sobre o processo de instalação, escolha de soluções de limpeza ou precisar de suporte técnico especializado, não hesite em entrar em contato com a equipe da Matrix LCMS. Estamos prontos para ajudar você a otimizar seus processos laboratoriais e garantir que suas análises sejam sempre da mais alta qualidade. Não perca nossos próximos posts e vídeos educativos. Até a próxima!

⚡ MATRIX LCMS – A melhor experiência para o seu laboratório ⚡

Baixe nosso catálogo atualizado.

Fale com um consultor especializado via Whatsapp

Acompanhe nossas redes sociais e fique por dentro das novidades: Instagram | Facebook | Linkedin

Conheça os melhores equipamento de cromatografia líquida | espectrometria de massas | análises térmicas